Kısa Zincirli Yağ Asitleri GC-MS Analizi Kiti
Kısa zincirli yağ asitleri (KZYA) prebiyotiklerin bağırsak mikrobik fermantasyonu, özellikle sindirilmemiş diyet karbonhidratları, dirençli nişastalar ve diyet lifleri tarafından üretilen organik asitlerdir. Temel olarak, KZYA’lar mikrobiyotanın metabolik etkilerinin ve besin kaynakları ile etkileşimlerinin ürünleridir. KZYA seviyeleri obezite ve diyabet ile yakından ilişkilidir: Bağırsak mikrobiyota obeziteyi ve tip 1 ve tip 2 diyabetes mellitus (T1D ve T2D) gelişimini açıkça etkilediği görülmektedir. Asetat, propionat ve bütirat-sistemimizdeki en bol bulunan KZYA’lar-bağırsak mikrobiyotası tarafından kabaca 3:1:1 oranında üretilir. Çoğu doğrudan kolonositlerde metabolize edilir; geri kalanı karaciğer, kas, böbrek, beyin ve kalbe enerji sağlayan hepatik portal dolaşımına emilir. Bağırsak epiteline emilen asetat, asetil CoA’ya dönüştürüldükten sonra trikarboksilik asit (TCA) döngüsüne (sitrik asit döngüsü veya Krebs döngüsü olarak da bilinir) girer ve ATP, kolesterol ve yağ asitleri üretir. Propionat, karaciğere ulaşmadan önce bağırsakta glukoneogenez için bir substrattır. Bağırsak epitelinden de novo sentezlenmiş glikoz, portal venden kaynaklanan bağırsak-beyin nöral devresi tarafından algılanır ve bu da insülin duyarlılığını ve glukoz toleransını artırır.
-
Kit Özellikleri
Toplam 13.3 dk analiz süresi
KZYA’ların eş zamanlı analizi
Küçük hacimlerde numune gereksinimi
Uzun ömürlü GC kolonu -
Parametreler
Asetik asit, Propiyonik asit, Isobutirik asit, Butirik asit, Isovalerik asit, Valerik asit, 4-Metilvalerik
asit, Hekzanoik asit, Heptanoik asit. -
Numune Türü
Serum/Plazma, Dışkı
Numune Hazırlama
-
Aşama 1Serum/Plazma Numune Hazırlığı
200 μl serum örneği ependorf içerisine alınır -
Aşama 220 μl internal standart ve 15 μl Reaktif-1 numune üzerine eklenerek 10 sn vortexlenir
-
Aşama 3300 μl Reaktif-2 ilave edilerek 15 dakika çalkalayıcıda bekletilir. 10000 rpm’de 10 dakika santrifüj edilir
-
Aşama 4Üst fazdan 200 μl HPLC viali içerisine alınır
-
Aşama 5Alt faz üzerine yeniden 300 μl Reaktif-2 eklenir ve 10 sn vortexlenerek 10000 rpm’de 10 dakika santrifüj edilir
-
Aşama 6Üst fazdan 200 μl aynı HPLC vialine alınarak üst fazlar birleştirilir
-
Aşama 7Elde edilen ekstrakt 20 μl Reaktif-3 ile muamele edilerek 10 sn vortexlenir
-
Aşama 860°C’de 30 dk inkübasyona bırakılır
-
Aşama 9Oda koşullarına gelen numune GC-MS sistemine enjekte edilir
Numune Hazırlama
-
Aşama 1Dışkı Numune Hazırlığı
30 mg fekal numune santrifüj tüpüne tartılır -
Aşama 21 ml deiyonize su eklenir ve 15 dk mekanik karıştırıcıda çalkalanır ve 15 dakika 2-8°C’de bekletilir
-
Aşama 310000rpm’de 10 dakika santifüj edilir
-
Aşama 4Üst fazdan 50 μl serum örneği ependorf içerisine alınır
-
Aşama 520 μl internal standart ve 15 μl Reaktif-1 numune üzerine eklenerek 10 sn vortexlenir
-
Aşama 6300 μl Reaktif-2 ilave edilerek 15 dakika çalkalayıcıda bekletilir. 10000 rpm’de 10 dakika santrifüj edilir
-
Aşama 7Üst fazdan 200 μl HPLC viali içerisine alınır
-
KROMATOGRAM
-
METOT PERFORMANS